Помощь по Теле2, тарифы, вопросы

Практика

Плотные среды

Висмут-сульфит агар

______________________________________________

Паратиф А Сальмонеллез

Готовая среда непрозрачна зелено-горохового цвета. Строго селективная среда для выделения чистых культур сальмонелл. Salmonella typhi, Salmonella enteritidis и Salmonella typhimurium обычно образуют на этой среде черные колонии с металлическим блеском, окруженные зоной почернения в результате продукции сероводорода и восстановления сульфита до сульфида железа, имеющего черный цвет. Salmonella paratyphi A образует светло-зеленые колонии.

Эталон ответа: На плотной среде «Висмут-сульфит агар» обнаружены мелкие колонии. Гладкие с ровным краем, темные и непрозрачные с металлическим блеском.

______________________________________________

Среда Левина

Эталон ответа: На данной среде – среде Левина обнаружены мелкие гладкие колонии с ровным краем сине-фиолетового цвета с металлическим блеском, с ферментированием лактозы до кислоты. Индикатор – метиленовая синька. Предварительный диагноз – колиэнтерит, вызванный кишечной палочкой - Escherichia coli .

Эталон ответа: Данная среда – среда Левина, сделанная с целью получения изолированных колоний. На среде обнаружены мелкие гладкие прозрачные неокрашенные колонии, и ферментирование лактозы – отсутствует. Преддиагноз – дизентерия, вызванная возможными возбудителями:

Серогруппа A: Shigella dysenteriae (10 сероваров)

Серогруппа B: S. flexneri (6 сероваров и подтипы)

Серогруппа C: S. boydii (15 сероваров)

Серогруппа D: S. sonnei (1 сероваров)

______________________________________________

Среда Эндо

______________________________________________

Эталон ответа: Данная среда является средой Эндо. На ней обнаружены мелкие бесцветные, прозрачные, гладкие с ровным краем колонии. Разложение лактозы до кислоты отсутствует, о чем говорит данные цвет среды. Использован индикатор Андраде. Предполагаемый диагноз – брюшной тиф, вызванный Salmonella Typhi .

Эталон ответа: Данная среда используется для накопления изолированных колоний. Среда – Эндо. Обнаружены мелкие гладкие с ровным краем, красные с металлическим блеском из-за разложении лактозы до кислоты с использованием индикатора Андраде. Предварительный диагноз – колиэнтерит, вызванный кишечной палочкой - Escherichia coli .

______________________________________________

Методы определения чувствительности к антибиотикам

______________________________________________

Эталон ответа: В чашке Петри представлен метод определения чувствительности к антибиотикам – метод бумажных дисков, при котором на поверхность агара в чашке Петри наносят бактериальную суспензию и затем помещают диски, содержащие определенное количество антибиотика. Диффузия антибиотика в агар приводит к формированию зоны подавления роста микроорганизмов вокруг дисков. После инкубации чашек в термостате при температуре 35 о -37 о С в течение ночи учитывают результат путем измерения диаметра зоны вокруг диска в миллиметрах.

Выделенная культура высоко чувствительна к мономицину, диаметр к задержке роста равен 30 мм, неомицина – 26 мм, канамицина – 20, а левомицитина – нет вообще. Характерно для кишечной палочкой - Escherichia coli .

______________________________________________

Посев из воздуха

______________________________________________

Эталон ответа: На данном пластинчатом агаре произведен посев из воздуха седиментационным методом. Показанием загрязненности воздуха закрытого помещения является общее количество бактерий на 1 кубический метр. Определяется количество бактерий за 10 минут. Для этого чашку Петри с пластинчатым МПА оставляют открытой на воздухе в течение 10 минут, затем инкубируют в термостате при температуре 37 градусов, сутки. Результаты подсчитывают по суммарному количеству колоний. Норма в операционной перед операцией равна – 3-5 колонии. После – 15. Также существует аспирационный метод, где воздух оценивают специальным прибором Кротового.

______________________________________________

Смесь микроорганизмов

______________________________________________

Цветной ряд

______________________________________________

Дизентерия

______________________________________________

МПБ (для опред протеолитических св-в): H2S-; Индол-;

Маннит: Кислота+; Газ-;

Мальтоза: Кислота+; Газ-;

Среда Пешкова: рост по уколу, цвет изменился в красный, что говорит о ферментации маннита до кислоты. Индикатор – Андраде;

______________________________________________

Кишечная палочка

______________________________________________

МПБ (для опред протеолитических св-в): H2S+(почернела); Индол+(покраснела);

Глюкоза: Кислота+; Газ+;

Лактоза: Кислота+; Газ+;

Мальтоза: Кислота+; Газ+;

Сахароза: Кислота-; Газ-;

Среда Пешкова: помутнение всего столбика (культура подвижна), цвет изменился в красный, что говорит о ферментации маннита до кислоты и наличие пузырьков газа. Индикатор – Андраде;

Среда Ресселя (Индикатор – бромтимоловый синий): Скос и столбик имеет желтый цвет, а в толще – газ, что свидетельствует о разложении лактозы и фруктозы до газа и кислоты.

Брюшной тиф

______________________________________________

Среда Гисса (Индикатор – водно-розоловый):

Глюкоза: Кислота+; Газ-;

Мальтоза: Кислота+; Газ-;

Маннит: Кислота+; Газ-;

Лактоза: Кислота-; Газ-;

Сахароза: Кислота-; Газ-;

Среда Пешкова: помутнение всего столбика (культура подвижна), цвет изменился в красный, что говорит о ферментации маннита до кислоты. Газ – отсутствует. Индикатор – Андраде;

______________________________________________

Сальмонеллез

______________________________________________

МПБ (для опред протеолитических св-в): H2S+(почернела); Индол-;

Среда Гисса (Индикатор – водно-розоловый):

Мальтоза: Кислота+; Газ-;

Сахароза: Кислота-; Газ-;

Среда Пешкова: помутнение всего столбика (культура подвижна), цвет изменился в красный, что говорит о ферментации маннита до кислоты и газа. Индикатор – Андраде;

Среда Ресселя (Индикатор – бромтимоловый синий): Скос имеет неизмененный цвет, а столбик - желтый цвет. В толще – газ, что свидетельствует о разложении фруктозы до газа и кислоты, лактоза – неферментированна.

______________________________________________

Газовая гангрена

______________________________________________

Среда Китта-Тароцци: жидкая среда для культивирования анаэробов. Для ее приготовления нарезанную мелкими кусочками печень (мясо) заливают трехкратным количеством МПБ, кипятят 30 мин, фильтруют. Просушенные кусочки печени раскладывают (для адсорбции кислорода) в пробирки и заливают бульоном. Стерилизуют при 120°С в течение 30 мин. Перед использованием прогревают и заливают стерильным нейтральным парафиновым маслом.

На данной среде обнаружен рост в виде помутнения. Также есть газообразование.

______________________________________________

Ботулизм

______________________________________________

Среда Вейнберга: полужидкая питательная среда, применяемая для культивирования патогенных анаэробов, представляющая собой мясопептонный бульон, содержащий 1% агара и 0,2% глюкозы;

В столбике сахарного агара обнаружены мелкие, дискообразные, пушинчатые колонии. Среда разорвана из-за повышенного образования газа при ферментации глюкозы.

Производят распил. Пастеровской пипеткой или иглой берут часть колоний и помещают в среду Китта-Тароцци, для накопления.

______________________________________________

Реакция агглютинации (развернутая)

______________________________________________

NB!: Друзья, не забываем, что читать реакции нужно с конца – проверка контроля сыворотки и антигена. После у вас, скорее всего, спросят определение титра агглютинирующей сыворотки (макси­мальное разведение сыворотки, при котором происходит агглютинация с соответствую­щим микроорганизмом ) и титра диагностической сыворотки (титр антител к конкретному возбудителю болезни в сыворотке крови, выявляемый у больных и не наблюдающийся у здоровых людей ).

Эталон ответа: Данная реакция представляет собой развернутую реакцию агглютинации. Контроль сыворотки представлен в виде прозрачной жидкости и является отрицательным. В контроле антигена – помутнение, тоже отрицательный. Смотрим разведение 1/100 – прозрачная с зонтиком на дне, при встряхивании - хлопья, значит реакция положительная. И так до 1/6400 . Смотрим разведение 1/12800, заметно помутнение – реакция отрицательна.

Следовательно, реакция агглютинации положительна до разведения 1/6400, при отрицательных контролях, значит титр исследуемой сыворотки - 1/6400.

Реакция агглютинации - склеивание корпускул (бактерий, эритроцитов и др.) антителами в присутствии электролитов - натрия хлорида.

______________________________________________

Реакция связывания комплимента

______________________________________________

РСК основана на активации комплемента комплексом антиген-антитело.

Проходит в две стадии:

Инкубация смеси: антиген+антитело+комплемент

Индикаторная: выявление одного комплемента путем добавления гемолитической системы (эритроциты барана+гемолитическая сыворотка в тройном титре)

Эталон ответа: Произведен учет РСК с сыворотками больных 1 и 2 для выявления в них антител к соответствующему антигену. Реакция с сывороткой больного 2 – отрицательна, так как в первой стадии антитело и антиген не подошли друг другу и не связались, а значит они и не связали комплемент. Тогда свободный комплемент соединяется с гемолитической системой и происходит лизис. В сыворотке больного 1 обнаружена задержка гемолиза, значит комплекс «антитело+антиген+комплемент» образовался. Комплемент связан и не присоединяется к гемолитической системе. Гемолиз отсутствует. Диагноз положительный.

______________________________________________

Реакция пассивной (непрямой) гемагглютинации

______________________________________________

В РНГА выявляют антитела сыворотки крови с помощью антигенного эритроцитарного диагностикума , который представляет собой эритроциты с адсорбированными на них антигенами.

РПГА ставят в пластиковых планшетках или в пробирках с разведениями сыворотки крови больного, к которым добавляют эритроцитарный диагностикум.

Эритроциты (или частицы латекса) с адсорбированными на них антигенами взаимодействуют с соответствующими антителами сыворотки крови, что вызывает склеивание и выпадение эритроцитов на дно пробирки или ячейки в виде фестончатого осадка. При отрицательной реакции эритроциты оседают в виде пуговки.

Состав (в пересчете на 1 л готовой среды):

Пептон ферментативный, сухой - 10,0 г.
Экстракт автолизированных дрожжей осветленный - 1,5 г.
Лактоза - 10,0 г.
Натрий фосфорнокислый двузамещенный - 2,0 г.
Агар микробиологический - 13,0 г.
Натрия хлорид - 3,0 г.
Эозин натрия, индикатор - 0,4 г.
Метиленовый голубой, индикатор - 0,075 г.

Плотная питательная среда для выделения и дифференциации энтеробактерий из исследуемого материала по признаку ферментации лактозы.

Сухую среду в количестве 40 г размешать в 1 л воды очищенной, довести до кипения и кипятить до полного расплавления агара (2-3 мин), профильтровать через ватно-марлевый фильтр, Разлить в стерильные бутылки и стерилизовать автоклавированием при температуре 112 оС в течение 20 мин. Стерильную среду охладить до температуры 45-48оС и разлить в стерильные чашки Петри; после застывания агара подсушить чашки при температуре 37оС в течение 40-60 мин. Цвет готовой среды должен быть красновато кирпичный.

Готовую среду до использования можно хранить в темном месте не более 7 сут при температуре 2-8°С.